دستگاه Agilent 1260 Infinity II و کاربرد آن در تعیین ناخالصی‌ها (Related Substances)

Agilent 1260 Infinity II یک سیستم HPLC پیشرفته و ماژولار است که برای جداسازی، شناسایی و کمی‌سازی ترکیبات در محلول‌ها طراحی شداست.  این دستگاه در صنایع دارویی و کنترل کیفیت کاربرد دارد. این دستگاه جهت تعیین میزان  ناخالصی‌ها ، ایده‌آل است.
Agilent 1260 Infinity II یک HPLC دقیق و قابل اعتماد است .این دستگاه برای آنالیز ناخالصی در داروها طراحی شده و با پمپ کواترنری، دتکتور DAD،اتوسمپلر پیشرفته و کنترل دمای ستون ،امکان جداسازی،شناسایی و اندازه گیری دقیق ناخالصی هارا فراهم می کند.

تفاوت نوع آزمون assay و Related Substances در دستگاه  مدل 1260 Infinity II 

Assay (آزمون مقدار ماده مؤثره)

اندازه‌گیری مقدار API اصلی در نمونه وتعیین میزان ماده مؤثره در قرص / کپسول / API

ویژگی‌ها:
تمرکز فقط روی یک پیک اصلی
ناخالصی‌ها مهم نیستند
روش ساده‌تر
زمان آنالیز کوتاه‌تر
حساسیت معمولی

 Related Substances (ناخالصی‌ها)

شناسایی و اندازه‌گیری ناخالصی‌ها و محصولات تخریبی و تعیین مقدار آنها

ویژگی‌ها:
چندین پیک (API + ناخالصی‌ها)
حساسیت بالا
جداسازی خیلی دقیق
روش پیچیده‌تر
زمان آنالیز طولانی‌تر

 نحوه عملکرد

 آماده‌سازی نمونه
نمونه‌های API، قرص یا کپسول ابتدا حل می‌شوند در حلال مناسب.
محلول فیلتر می‌شود (معمولاً با فیلتر PVDF 0.45 میکرون) تا ذرات معلق حذف شوند.
محلول به ویال HPLC منتقل می‌شود.
هدف: ورود نمونه‌ی صاف و یکنواخت به دستگاه برای جلوگیری از گرفتگی ستون و افزایش دقت.

 تزریق نمونه (Autosampler)
اتوسمپلر حجم مشخصی از نمونه (مثلاً 10–20 µL) را به صورت خودکار به خط تزریق HPLC منتقل می‌کند.
تزریق دقیق و تکرارپذیر (%RSD پایین) برای نتایج قابل اعتماد ضروری است.
اتوسمپلر همچنین از Carry-over بین نمونه‌ها جلوگیری می‌کند.
هدف: تزریق کنترل شده و تکرارپذیر نمونه برای اندازه‌گیری دقیق ناخالصی‌ها.

حرکت نمونه در ستون (Separation)
ستون C18 فاز ثابت دارد، که ترکیبات نمونه بر اساس خواص شیمیایی و قطبیت جدا می‌شوند.
پمپ کواترنری فاز متحرک (Buffer + Acetonitrile) را با فشار و جریان دقیق به ستون می‌رساند.
زمان بازداری هر پیک (Retention Time) بستگی به تعامل ماده با ستون و فاز متحرک دارد.
هدف: جداسازی ناخالصی‌ها از API و از یکدیگر.

دتکشن (Detection)
دتکتور DAD/PDA نمونه‌ی خروجی از ستون را اسکن طیفی UV-Vis می‌کند.
هر ترکیب یک پیک با ارتفاع و مساحت مشخص تولید می‌کند.
دتکتور امکان بررسی Peak Purity را فراهم می‌کند تا مشخص شود آیا پیک API خالص است یا ترکیبی از چند ناخالصی.
هدف: تشخیص و شناسایی ناخالصی‌ها حتی در مقادیر بسیار کم (ppm) و ارزیابی خلوص پیک API.

 نرم‌افزار و تحلیل داده‌ها
نرم‌افزار دستگاه پیک‌ها را انتگریت و محاسبه می‌کند.
ناخالصی‌ها نسبت به استاندارد مرجع مقایسه می‌شوند و درصد آنها گزارش می‌شود.
سیستم suitability بررسی می‌کند که رزولوشن >2 و %RSD <2 باشد تا جداسازی قابل اعتماد باشد.
هدف: خروجی دقیق و قابل گزارش مطابق با استانداردهای USP و EP.

کنترل دما و شرایط محیطی
ستون در دمای ثابت (مثلاً 25 °C) نگه داشته می‌شود.
این کنترل باعث پایداری زمان بازداری و جداسازی بهتر ناخالصی‌ها می‌شود.
هدف: افزایش دقت و تکرارپذیری نتایج.