در حوزه کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) برای Assay یا آنالیز کمّی API (Active Pharmaceutical Ingredient) در داروسازی، یکی از انتخاب‌های استاندارد و معتبر در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت و توسعه روش، سیستم‌های Agilent 1260 Infinity II HPLC System و مدل‌های مرتبط از خانواده Agilent 1260 Infinity II کمپانی Agilent هستند. این سیستم‌ها برای آنالیز جداسازی، شناسایی و کمّی‌سازی داروها و APIهای دارویی در محصولات و نمونه‌های پیچیده طراحی شده‌اند و در بسیاری از استانداردهای QC دارویی پذیرفته شده‌اند.

ستون را با فاز متحرک اولیه شامل ۷۰٪ حلال A و ۳۰٪ حلال B با دبی ۱ میلی‌لیتر بر دقیقه به مدت ۱۵ دقیقه تعادل‌دهی کنید.
قرص‌ها یا کپسول‌ها را در فاز متحرک (مخلوط A/B) حل کرده، از فیلتر PVDF با اندازه منافذ ۰٫۴۵ میکرون عبور دهید و ۱ میلی‌لیتر از محلول را به ویال HPLC منتقل کنید.
پارامترهای آشکارساز را تنظیم کنید: طول موج ۲۵۴ نانومتر، زمان پاسخ ۰٫۱ ثانیه، پهنای باند ۴ نانومتر.
برای هر نمونه ۱۰ میکرولیتر تزریق کنید.
آنالیز ایزوکراتیک را به مدت ۱۵ دقیقه آغاز کنید (در صورت نیاز روش، گرادیان اختیاری ۱۰ دقیقه‌ای از ۶۰ تا ۸۰٪ حلال A).
کنترل کفایت سیستم: تفکیک‌پذیری بیشتر از ۲٫۰، و درصد RSD برای ۶ تزریق تکراری کمتر از ۲٪.
مساحت پیک ماده مؤثره (API) را انتگرال‌گیری کرده و درصد مقدار اسمی دارو را با استفاده از منحنی کالیبراسیون استاندارد محاسبه کنید.

تنظیمات:
Column Oven Temp: 25 °C
Injection Volume: 10–20 µL
Sample Type: Tablets, Capsules, Syrups, Injectable
ستون:
Agilent: ZORBAX Eclipse Plus C18, 150 × 4.6 mm, 5 µm (959990-902)
Column Temp: 25 °C
فازمتحرک:
Solvent A: 20 mM KH₂PO₄ buffer, pH 3.0 (Merck 1.04968.1000)
Solvent B: HPLC grade Acetonitrile (Merck 1.00030.2500)
تنظیمات حلال:
Isocratic: 70%A / 30%B
Optional Gradient: 60–80%A over 10 min
Flow Rate: 1 mL/min
اتوسمپلر و ویال :
Agilent 1260 ALS: Standard vials 2 mL (P/N 5190-2290)
دتکتور:
UV @ 254 nm
PDA scan: 210–280 nm
DAD: Reference wavelength 360 nm (background correction