سیستم ACQUITY H‑Class HPLC شرکت Waters یک دستگاه کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC/UPLC) است .این دستگاه به‌طور ویژه برای تست کمی و کیفی مواد فعال دارویی (API) در صنعت داروسازی طراحی شده است. این سیستم ترکیبی از دقت و پایداری HPLC سنتی با سرعت و تفکیک‌پذیری بالای UPLC را ارائه می‌دهد.  به همین دلیل برای Assay API، بررسی ناخالصی‌ها و کنترل کیفیت محصولات دارویی بسیار مناسب است. ACQUITY H‑Class قابلیت اجرای روش‌های گرادیان و ایزوکراتیک با استفاده از فاز متحرک چندحلالی (Quaternary Solvent Manager)، کنترل دقیق دما و جریان و تزریق‌های تکرارپذیر با حداقل carry-over را دارد. همچنین با نرم‌افزار Empower CDS کنترل می‌شود که امکان ثبت داده‌ها، گزارش‌گیری و تطابق با استانداردهای GMP و GLP را فراهم می‌کند، و به آزمایشگاه‌های دارویی کمک می‌کند تا نتایج Assay دقیق، قابل اعتماد و قابل استناد تولید کنند.

نحوه عملکرد

عملکرد سیستم ACQUITY H‑Class HPLC اساساً بر پایه جداسازی ترکیبات در فاز مایع تحت فشار بالا است و مراحل آن برای Assay API در داروسازی به این صورت است:
تهیه و تزریق نمونه
نمونه (مثل داروی خالص یا محلول API) در ویال یا بطری نمونه قرار می‌گیرد.
Sample Manager دستگاه، نمونه را با دقت بالا و حجم مشخص وارد سیستم می‌کند.
طراحی Flow‑Through Needle باعث تزریق یکنواخت و بدون Carry-over می‌شود.
 انتقال نمونه به ستون کروماتوگرافی
نمونه با فاز متحرک (Mobile Phase) که می‌تواند ترکیبی از چند حلال باشد (Quaternary Solvent Manager)، به ستون منتقل می‌شود.
جریان فاز متحرک تحت فشار بالا (تا 15,000 psi) باعث حرکت نمونه از طریق ستون می‌شود.
 جداسازی در ستون
ستون HPLC یا UPLC حاوی ذرات سیلیکا یا پلیمر با اندازه مشخص است.
ترکیبات مختلف در نمونه بر اساس تعامل با فاز ساکن ستون (Stationary Phase) با سرعت‌های متفاوت حرکت می‌کنند.
این اختلاف سرعت باعث تفکیک ترکیبات از هم می‌شود.
تشخیص ترکیبات (Detection)
ترکیبات جدا شده از ستون وارد آشکارساز می‌شوند، معمولاً PDA (Photodiode Array) یا UV/VIS.
آشکارساز شدت نور جذب شده توسط هر ترکیب را اندازه می‌گیرد و یک کروماتوگرام تولید می‌کند.
از روی این کروماتوگرام می‌توان غلظت و خلوص API را محاسبه کرد.
 ثبت و پردازش داده‌ها
نرم‌افزار Empower CDS داده‌ها را ثبت، پردازش و تحلیل می‌کند.
گزارش‌ها مطابق استانداردهای دارویی و GMP/GLP آماده می‌شوند.
دستگاه قابلیت اجرای گرادیان‌های پیچیده، کنترل دما و نرخ جریان دقیق را دارد تا تکرارپذیری و دقت بالا حفظ شود.

نحوه کار با دستگاه ACQUITY H‑Class HPLC

آماده‌سازی دستگاه و مواد

بررسی وضعیت دستگاه: اطمینان از روشن بودن سیستم، پمپ‌ها، آشکارساز و Column Manager.
تهیه فاز متحرک: حلال‌ها را طبق روش Assay آماده و در مخازن فاز متحرک قرار دهید.
دمش حلال (Degassing): حلال‌ها را با سیستم degasser یا به صورت دستی تهویه کنید تا حباب هوا در سیستم نباشد.
آماده‌سازی نمونه‌ها: نمونه API را حل کرده و از فیلترهای 0.22 یا 0.45 میکرونی عبور دهید تا ذرات معلق حذف شوند.
 راه‌اندازی نرم‌افزار
نرم‌افزار Empower CDS را باز کنید.
روش تحلیلی (Method) مورد نظر برای Assay API را انتخاب یا بارگذاری کنید. این روش شامل:
نوع ستون
فاز متحرک و نسبت‌ها
دما و سرعت جریان
طول موج آشکارساز
حجم تزریق نمونه
 آماده‌سازی و تزریق نمونه
ویال‌های نمونه را در Auto Sampler قرار دهید.
حجم تزریق مشخص (مثلاً 5–20 μL) توسط Flow‑Through Needle به صورت دقیق وارد ستون می‌شود.
سیستم شروع به انتقال نمونه از طریق فاز متحرک به ستون می‌کند.
 اجرای کروماتوگرافی
نمونه در ستون حرکت کرده و ترکیبات آن بر اساس تعامل با فاز ساکن ستون جدا می‌شوند.
آشکارساز UV/PDA شدت جذب هر ترکیب را ثبت می‌کند و یک کروماتوگرام تولید می‌شود.
در صورت استفاده از روش گرادیان، سیستم نسبت حلال‌ها را در طول زمان تغییر می‌دهد تا جداسازی بهینه شود.
 پردازش داده‌ها و تحلیل
نرم‌افزار Empower CDS کروماتوگرام را تحلیل کرده و ارتفاع یا مساحت پیک‌ها را برای تعیین غلظت محاسبه می‌کند.
گزارش‌های Assay API شامل مقدار دقیق و درصد خلوص تولید می‌شوند.
داده‌ها به صورت تکرارپذیر و استاندارد ثبت می‌شوند و امکان ذخیره و چاپ گزارش مطابق GMP وجود دارد.

نگهداری و اتمام کار
پس از اتمام تحلیل، ستون را با حلال نگهدارنده شستشو دهید.
Auto Sampler را تمیز و ویال‌ها را خارج کنید.
سیستم را خاموش یا در حالت آماده نگه‌دارید.